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病原體檢測試劑盒操作的幾大要點須知

  • 釋出日期↟▩✘:2022-06-13      瀏覽次數↟▩✘:58
    •   病原體檢測試劑盒是一種經典的利用DNA熒光染色法檢測支原體汙染的試劑盒☁₪◕✘,其原理是當細胞發生凋亡時☁₪◕✘,染色質會固縮☁₪◕✘,Hoechst染色後在熒光顯微鏡下觀察☁₪◕✘,正常細胞的細胞核呈正常的藍色☁₪◕✘,而凋亡細胞的細胞核會呈緻密濃染☁₪◕✘,或呈碎塊狀緻密濃染☁₪◕✘,顏色有些發白◕₪•│。
       
        病原體檢測試劑盒操作步驟↟▩✘:
        (一)貼壁細胞
        1✘☁│、將蓋玻片置於6孔板或其他培養皿內☁₪◕✘,接種細胞培養過夜☁₪◕✘,使融合率約為50%~80%◕₪•│。
        2✘☁│、加入干預條件使細胞發生凋亡後☁₪◕✘,吸盡培養液☁₪◕✘,加入Hoechst固定液◕₪•│。
        3✘☁│、去除固定液☁₪◕✘,用PBS或生理鹽水洗2次◕₪•│。洗滌時宜用搖床☁₪◕✘,或手動晃動◕₪•│。
        4✘☁│、加入Hoechst 染色液☁₪◕✘,孵育◕₪•│。也宜用搖床☁₪◕✘,或手動晃動數次◕₪•│。
        5✘☁│、棄染色液☁₪◕✘,PBS或生理鹽水洗2次☁₪◕✘,吸盡液體◕₪•│。洗滌時宜用搖床☁₪◕✘,或手動晃動◕₪•│。
        6✘☁│、滴一滴抗熒封片劑於載玻片上☁₪◕✘,蓋上貼有細胞的蓋玻片☁₪◕✘,避免氣泡◕₪•│。
        (二)懸浮細胞
        1✘☁│、加入Hoechst固定液☁₪◕✘,緩緩懇起細胞☁₪◕✘,固定10min或更長時間(亦可4℃過夜)◕₪•│。
        2✘☁│、低速離心去除固定液☁₪◕✘,用PBS 或生理鹽水洗2次◕₪•│。洗滌時手動晃動數次◕₪•│。
        4✘☁│、稍晾乾☁₪◕✘,使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動◕₪•│。
        5✘☁│、均勻滴上Hoechst染色液◕₪•│。用吸水紙從邊緣吸去液體☁₪◕✘,微晾乾◕₪•│。
        6✘☁│、棄染色液☁₪◕✘,用PBS或生理鹽水洗2次☁₪◕✘,吸盡液體◕₪•│。洗滌時宜用搖床手動◕₪•│。
        7✘☁│、滴一滴抗熒光封片劑於載玻片上☁₪◕✘,蓋上一潔淨的蓋玻片☁₪◕✘,儘量避免氣泡◕₪•│。
        8✘☁│、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核◕₪•│。
        (三)組織切片
        1✘☁│、常規包埋切片◕₪•│。用PBS 或生理鹽水洗2次◕₪•│。洗滌時手動晃動數次◕₪•│。
        2✘☁│、均勻滴上Hoechst染色液◕₪•│。.
        3✘☁│、棄染色液☁₪◕✘,PBS或生理鹽水洗2次☁₪◕✘,吸盡液體◕₪•│。洗滌時宜用搖床或手動◕₪•│。
        4✘☁│、將切片置於載玻片上☁₪◕✘,滴一滴抗熒光封片劑☁₪◕✘,蓋上一潔淨的蓋玻片☁₪◕✘,儘量避免氣泡◕₪•│。
        5✘☁│、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核◕₪•│。激發波長350nm左右☁₪◕✘,發射波長460nm左右◕₪•│。
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