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病原體檢測試劑盒操作的幾大要點須知

  • 釋出日期↟•▩↟│:2022-06-13      瀏覽次數↟•▩↟│:214
    •   病原體檢測試劑盒是一種經典的利用DNA熒光染色法檢測支原體汙染的試劑盒◕☁◕▩₪,其原理是當細胞發生凋亡時◕☁◕▩₪,染色質會固縮◕☁◕▩₪,Hoechst染色後在熒光顯微鏡下觀察◕☁◕▩₪,正常細胞的細胞核呈正常的藍色◕☁◕▩₪,而凋亡細胞的細胞核會呈緻密濃染◕☁◕▩₪,或呈碎塊狀緻密濃染◕☁◕▩₪,顏色有些發白·₪☁·。
       
        病原體檢測試劑盒操作步驟↟•▩↟│:
        (一)貼壁細胞
        1₪│☁、將蓋玻片置於6孔板或其他培養皿內◕☁◕▩₪,接種細胞培養過夜◕☁◕▩₪,使融合率約為50%~80%·₪☁·。
        2₪│☁、加入干預條件使細胞發生凋亡後◕☁◕▩₪,吸盡培養液◕☁◕▩₪,加入Hoechst固定液·₪☁·。
        3₪│☁、去除固定液◕☁◕▩₪,用PBS或生理鹽水洗2次·₪☁·。洗滌時宜用搖床◕☁◕▩₪,或手動晃動·₪☁·。
        4₪│☁、加入Hoechst 染色液◕☁◕▩₪,孵育·₪☁·。也宜用搖床◕☁◕▩₪,或手動晃動數次·₪☁·。
        5₪│☁、棄染色液◕☁◕▩₪,PBS或生理鹽水洗2次◕☁◕▩₪,吸盡液體·₪☁·。洗滌時宜用搖床◕☁◕▩₪,或手動晃動·₪☁·。
        6₪│☁、滴一滴抗熒封片劑於載玻片上◕☁◕▩₪,蓋上貼有細胞的蓋玻片◕☁◕▩₪,避免氣泡·₪☁·。
        (二)懸浮細胞
        1₪│☁、加入Hoechst固定液◕☁◕▩₪,緩緩懇起細胞◕☁◕▩₪,固定10min或更長時間(亦可4℃過夜)·₪☁·。
        2₪│☁、低速離心去除固定液◕☁◕▩₪,用PBS 或生理鹽水洗2次·₪☁·。洗滌時手動晃動數次·₪☁·。
        4₪│☁、稍晾乾◕☁◕▩₪,使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動·₪☁·。
        5₪│☁、均勻滴上Hoechst染色液·₪☁·。用吸水紙從邊緣吸去液體◕☁◕▩₪,微晾乾·₪☁·。
        6₪│☁、棄染色液◕☁◕▩₪,用PBS或生理鹽水洗2次◕☁◕▩₪,吸盡液體·₪☁·。洗滌時宜用搖床手動·₪☁·。
        7₪│☁、滴一滴抗熒光封片劑於載玻片上◕☁◕▩₪,蓋上一潔淨的蓋玻片◕☁◕▩₪,儘量避免氣泡·₪☁·。
        8₪│☁、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核·₪☁·。
        (三)組織切片
        1₪│☁、常規包埋切片·₪☁·。用PBS 或生理鹽水洗2次·₪☁·。洗滌時手動晃動數次·₪☁·。
        2₪│☁、均勻滴上Hoechst染色液·₪☁·。.
        3₪│☁、棄染色液◕☁◕▩₪,PBS或生理鹽水洗2次◕☁◕▩₪,吸盡液體·₪☁·。洗滌時宜用搖床或手動·₪☁·。
        4₪│☁、將切片置於載玻片上◕☁◕▩₪,滴一滴抗熒光封片劑◕☁◕▩₪,蓋上一潔淨的蓋玻片◕☁◕▩₪,儘量避免氣泡·₪☁·。
        5₪│☁、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核·₪☁·。激發波長350nm左右◕☁◕▩₪,發射波長460nm左右·₪☁·。
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